导读：淫羊藿提取物的雌激素样作用研究介绍。
目的
评价淫羊藿提取物的雌激素样作用。
方法
采用小鼠子宫增重实验、雌激素受体阳性细胞系(MCF?7)细胞增殖及拮抗实验，评价淫羊藿及淫羊藿苷的雌激素样作用及其可能机制。结果 与阴性对照组比较，淫羊藿及淫羊藿苷能使子宫系数由0.097±0.008明显增加至0.156±0.018及0.152±0.016，且用药前、后动物体重由(18.9±1.3)g分别增至(19.8±1.3)g及(20.03±1.3)g，增幅明显高于阴性对照组(P<0.05);淫羊藿苷可使血清雌激素E2由(132.22±11.45)ng/L增高至(147.73±12.43)ng/L，FSH水平由(50.15±3.36)μg/L降低至(44.47±2.46)μg/L(P<0.05)，但淫羊藿组雌激素E2水平无明显改变;在24、48、72h，淫羊藿及淫羊藿苷对MCF?7细胞的增殖均有明显的促进作用(P<0.05)，分别由0.238±0.043、0.387±0.051、0.563±0.083增至0.362±0.045、0.521±0.046、0.648±0.043及0.324±0.043、0.465±0.034、0.622±0.079;72h加入ICI后，细胞增殖明显受到抑制，细胞增值率分别降至99.461%、94.434%。结论 淫羊藿及淫羊藿苷具有雌激素样作用，且其促细胞增殖作用可能是通过雌激素受体(ER)介导产生的。
淫羊藿作为传统补肾壮阳药，具有显著的生物学活性[1]。体内药理实验研究显示，淫羊藿提取物具有性激素样作用，能使雌性小鼠子宫增重[2]，但其雌激素活性成分及作用机制尚不清晰。本实验选用淫羊藿苷含量较高的陕西产淫羊藿[3]，提取并纯化淫羊藿苷[4]，分别通过体内、外实验评价淫羊藿苷的雌激素样作用，为更年期妇女保健及雌激素依赖性肿瘤(如乳腺癌、子宫内膜癌等)患者的临床用药提供指导。
1 材料与方法
1.1 淫羊藿苷的提取及纯化[4]
淫羊藿纯化、浓缩后，总干燥物中淫羊藿苷含量为62.3%。淫羊藿药材为免煎剂，购自西安交通大学医学院第一附属医院中药房，生药含量300mg/mL。
1.2 动物、分组及给药
昆明种小鼠80只，雌性，出生后21d(断乳鼠)，体重9～12g，购自西安交通大学医学实验动物中心，二级动物室饲养。阳性药物为雌二醇注射液(E2)，2mg/mL，北京益民药业有限公司生产，用植物油配制成35μg/mL的悬浊液。实验动物按体重随机分为4组：阴性对照组、阳性对照组、淫羊藿组以及淫羊藿苷组，每组20只。实验动物适应性饲养6d后，阴性对照组给予等体积植物油;阳性对照组按0.35mg/(kg·d)给予E2;淫羊藿组按3g/(kg·d)给予淫羊藿;淫羊藿苷组按3.5mg/(kg·d)给予淫羊藿苷。早、晚各灌胃1次，连续4d。各组动物于最后1次给药后第2天，取10只称重，脱臼处死，心脏取血，分离血清，ELISA法测定雌二醇(E2)、黄体生成素(LH)、卵泡刺激素(FSH)水平;分离子宫并称重，计算子宫系数(即：子宫湿重/体重×100%)。另10只眼眶后静脉丛取血，4℃存放过夜，2000r/min离心10min，小心分离血清，56℃ 30min灭活补体，0.22μm微孔滤膜过滤，-20℃贮存，供细胞培养用。
1.3 细胞培养试剂及仪器
DMEM(高糖)、无酚红DMEM(高糖)、活性炭?葡聚糖苷处理的胎牛血清(CDT?FBS)为Hyclone公司产品;小牛血清(中国医学科学院生物工程研究所);E2、MTT、DMSO(Sigma公司);ICI 182，780(Tocris公司)。雌激素敏感性人乳腺癌MCF?7细胞购自中科院细胞生物研究所细胞库。CO2培养箱(BD);酶联免疫检测仪(EPSON LX?800);倒置显微镜(Olympus)。
1.4 细胞培养
人乳腺癌细胞系MCF?7于含100mL/L小牛血清的DMEM高糖溶液中培养，培养条件为37℃、50mL/L CO2、相对饱和湿度。实验开始前4d将细胞用PBS洗涤2次后，改为在无酚红DMEM(含50mL/L CDT?FBS)中培养，以耗尽细胞内储存的雌激素。
1.5 MTT细胞增殖实验
MCF?7细胞经无酚红DMEM(含50mL/L CDT?FBS)培养4d后，选取对数生长期细胞，用2.5g/L胰蛋白酶消化，PBS(pH 7.4)洗2次，加入无血清DMEM，以每孔2×103个的浓度接种于96孔板内。培养24h待细胞贴壁后，换为含100mL/L试验血清的DMEM培养液继续培养，每种血清设8个复孔。分别于24、48、72h时，加入MTT(5g/L，每孔15μL)继续孵育4h，弃去培养液，每孔加入DMSO 150μL，震荡5～10min，使结晶物完全溶解。以DMSO调零，用酶联免疫检测仪在570nm下测定各孔吸光度(A)值，计算平均A值和增殖率(proliferation rate，PR)。PR=(实验组A值/阴性对照组A值)×100%。
共3页: 上一页123下一页
(责任编辑：李炬)
相关阅读
